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T迷宮-學(xué)習(xí)記憶的行為學(xué)研究方法(3)

T迷宮-學(xué)習(xí)記憶的行為學(xué)研究方法(3)

T迷宮

        近半個世紀前,Kivy和Dember等人證明大鼠能辨別T-形迷宮(T-maze)兩臂顏色的變化。他們發(fā)現(xiàn),將雄性大鼠置于T-形迷宮的主干臂15~30min,讓其能看見、但不能進入黑白兩臂。然后,改變其中一個臂的顏色,使兩臂同為黑色或白色。讓大鼠自由選擇T-形臂。結(jié)果顯示,大鼠總是選擇改變了顏色的那個臂(新異臂)。這一過程要依靠動物的記憶來完成。由此發(fā)展而成的T-形迷宮實驗成為目前用于評價空間記憶的*常用的動物模型之一。當(dāng)然,現(xiàn)在的T-形迷宮使用的是食物而不是臂的顏色作為動物探究的動力。通常用這一模型來研究動物的空間工作記憶(spatialworking memory),即測定動物只在當(dāng)前操作期間有用的信息。經(jīng)改進后的T-形迷宮也可用來評價參考記憶(referencememory),即記錄在這一實驗中任何**、任何一次的測試都有用的信息。

  • (一)實驗設(shè)備  

      這里介紹上海欣軟信息科技游戲公司生產(chǎn)的T迷宮。迷宮由兩個長46cm、寬10cm、高10cm的目標(biāo)臂(goalarms)和一個與之垂直的長71cm、同樣寬度和高度的主干臂(stem)或起始臂(approachalley)組成。主干臂內(nèi)置一個16cm*16cm的起始箱,并有一閘門與主干臂的另一部分相聯(lián)。實驗用雄性成年大鼠。飲水不限,但進食控制在每天16~20g,以使體重保持在非進食大鼠體重的85%。在整個訓(xùn)練和測試期間,大鼠體重每周增加不超過5g。

  • (二) 實驗方法 

       這里介紹傳統(tǒng)T-形迷宮實驗和T-形迷宮自主交替實驗。

   1.傳統(tǒng)T-形迷宮實驗

(1)適應(yīng)  在T-形迷宮臂內(nèi)分撒6粒食丸(45g),讓大鼠適應(yīng)迷宮5min,每天一次,連續(xù)5天。

(2)強迫選擇訓(xùn)練  將大鼠放入主干臂的起始箱,打開閘門,讓大鼠進入迷宮的主干臂。隨機、交替選擇左右兩臂之一放入4粒食丸,同時關(guān)閉另一臂,使動物被迫選擇食物強化臂并完成攝食;每天6次,連續(xù)4天。

(3)延遲位置匹配(delayed matching-to-position,DMP)訓(xùn)練

1)將動物放入閘門關(guān)閉的起始箱,打開閘門,讓動物進入主干臂。

2)關(guān)閉一側(cè)目標(biāo)臂,強迫動物進入另一側(cè)開放臂以獲得2粒食丸獎賞。

3)立即(*短延遲,少于5s)將動物放回主干臂,開始匹配訓(xùn)練中的**次訓(xùn)練;此時兩個目標(biāo)臂均開放。動物將兩前肢和至少兩后肢的一部分置于一個目標(biāo)臂時完成“一次選擇”。動物返回到強迫選擇訓(xùn)練時進入過的臂則獲得食物獎賞(4粒食丸),記錄一次正確選擇;若動物進入另一臂,則沒有食物獎賞,并且將其限制在該臂內(nèi)10秒,記錄一次錯誤選擇。

4)一次匹配訓(xùn)練結(jié)束后將動物放回籠內(nèi)5~10min(與此同時訓(xùn)練其他動物),再重復(fù)下一次匹配訓(xùn)練。每天8次。

動物連續(xù)兩天的正確選擇次數(shù)達到15/16,則認為達到標(biāo)準(zhǔn),可以開始實驗。如動物經(jīng)過30天訓(xùn)練仍然達不到標(biāo)準(zhǔn),則予以淘汰。

5)動物訓(xùn)練達標(biāo)后**,給予一次匹配訓(xùn)練。所不同的是,強迫選擇訓(xùn)練后,將T-形迷宮旋轉(zhuǎn)180度,再進行上述開放臂的訓(xùn)練。這樣做的目的是評價動物是否為定位性操作(有賴于迷宮外信號)或反應(yīng)性操作(不依賴迷宮外信號)。

6)接著兩天,每天給予10次匹配訓(xùn)練,每次訓(xùn)練間隔為60s,用以評價動物的工作記憶操作。記錄進入食物強化臂的次數(shù)和再次進入非強化臂的次數(shù)。后者被認為是工作記憶錯誤。正常健康年輕的大鼠幾乎每次均能準(zhǔn)確操作。當(dāng)操作穩(wěn)定、且選擇準(zhǔn)確率高(工作記憶錯誤少于10%)時,可進行**測試或腦區(qū)毀損后的操作實驗。

  2.T-形迷宮自主交替實驗(spontaneous altemation on a T-maze) 1925年,Tolman**報道了一個有趣的發(fā)現(xiàn):在迷宮實驗中,大鼠極少重復(fù)進入迷宮的同一臂。大鼠以這種重復(fù)交替的方式探究周圍環(huán)境。因而,即使沒有食物獎賞,大鼠仍然保留對所探究區(qū)域有一定的新奇感。正常的交替操作與完整的工作記憶能力相一致。用藥理或解剖毀損的方法可改變這種交替操作行為。實驗方法如下:

(1)充分撫摸大鼠 每天1~2min,連續(xù)5~7d。由于大鼠沒有被剝奪進食,**對大鼠有驅(qū)動作用的是其探究迷宮的欲望。因此,動物必須對實驗者和實驗環(huán)境完全適應(yīng),沒有恐懼感。充分觸摸大鼠就顯得尤為重要。

(2)將大鼠放入T-形迷宮的主干臂;打開閘門,讓大鼠離開主干進入一個目標(biāo)臂(四肢進入臂內(nèi))。

(3)將大鼠放回主干臂,限其在臂內(nèi)一段時間(零倒數(shù)分鐘,但開始時設(shè)定5s比較合適)。

(4)將第2和第3步的操作重復(fù)9次,記錄進入每一臂的次數(shù)。對照大鼠在每一實驗間期(共10次訓(xùn)練)內(nèi)應(yīng)交替選擇兩目標(biāo)臂。實驗結(jié)果表述為同一實驗間期內(nèi)交替次數(shù)除以總的選擇次數(shù)。當(dāng)使用**或相關(guān)腦區(qū)毀損等方法減弱記憶力時,這個比率下降。

  • (三) 注意事項

1.大鼠和小鼠具有良好的空間辨別功能,能很快學(xué)會并準(zhǔn)確操作迷宮。因此,T-形迷宮和放射臂迷宮均被廣泛用于測試動物的空間記憶能力。T-形迷宮用于研究不同腦區(qū)對空間記憶的影響。它對某些腦結(jié)構(gòu),尤其是海馬的毀損作用敏感。此外,許多**或**都可增強或削弱動物在T-形迷宮的空間記憶。實驗所用的動物除大鼠和小鼠外,還包括豬、羊、烏龜和鴿子等。

2.動物選擇的準(zhǔn)確性與兩次選擇之間的間隔及每一訓(xùn)練間期內(nèi)的選擇訓(xùn)練次數(shù)等有關(guān)。正常動物經(jīng)短時間的間隔(例如5s),其選擇準(zhǔn)確性非常高。而經(jīng)過極長時間的間隔(例如超過1h),其選擇接近隨機性操作。強迫選擇訓(xùn)練后。如只給一次目標(biāo)臂選擇,準(zhǔn)確性通常很高。但是,如給予多次選擇,則選擇次數(shù)越多,準(zhǔn)確性越差。

3.嚙齒類動物有單向偏愛的特性。這種單向偏愛與動物種屬和品系有關(guān)。例如,C57BL/6J小鼠、ICR小鼠和Purdue-Wistar大鼠更偏愛左側(cè),而Spague-Dawley大鼠和Wistar大鼠更偏愛右側(cè)。研究表明,超過2/3的雄性Spague-Dawley大鼠偏愛右側(cè),而偏愛左側(cè)的不到1/5。這種單向偏愛可影響對動物學(xué)習(xí)記憶的評價。

4.主干臂的閘門是T-形迷宮的重要特征。它既可用于在兩次選擇之間將動物限制在起始箱內(nèi)一定的時間,也可防止動物在兩次選擇訓(xùn)練之間探究迷宮。因此,兩次選擇訓(xùn)練之間應(yīng)將動物迅速放回主干臂內(nèi)的起始箱。這一點很重要,它可確保動物不會去探究對側(cè)目標(biāo)臂。

5.當(dāng)動物對迷宮或?qū)嶒炚叩膽?yīng)激恐懼超過其對探究和覓食的渴望程度時,動物對迷宮的探究減少,甚至呆在迷宮某處不動而不去探究迷宮。這種恐懼表現(xiàn)為動物在迷宮內(nèi)排便和排尿;當(dāng)抓它時,動物還會發(fā)出尖叫聲。因此,足夠的應(yīng)激適應(yīng)是必要的。否則,如果動物在迷宮內(nèi)不進行臂的選擇,就無從得知它的記憶力是正常還是減弱。T迷宮-學(xué)習(xí)記憶的行為學(xué)研究方法(3)為經(jīng)典的實驗,后續(xù)還會進一步介紹更多的迷宮實驗。

滬公網(wǎng)安備 31011202007432號

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