摘要: 目的 評價蜘蛛香的黃酮類提取物和纈草三酯提取物的藥效。方法 采用熱板法、醋酸扭體法研究提取物的鎮(zhèn)痛作用; 炭末法、家兔離體腸肌研究提取物對胃腸運動的影響; 高架十字迷宮和明暗箱用于研究提取物抗焦慮實驗。結(jié)果 在給藥 60、120 min 時黃酮低劑量對提高小鼠痛閾值具有一定作用( P ＜0． 05) ，總黃酮中、高劑量均能顯著提高小鼠痛閾值( P ＜0. 01) ，纈草三酯各給藥組對小鼠熱刺激致痛的抑制作用不顯著，總黃酮提取物高劑量能顯著延長扭體反應(yīng)的潛伏期和減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)( P ＜0． 01) ，纈草三酯提取物各劑量的作用不顯著( P ＞0． 05) ; 黃酮提取物中、高劑量和纈草三酯提取物高劑量都能顯著增加小腸炭末的推進率( P ＜ 0． 01) ，黃酮提取物高劑量對家兔離體腸肌均有顯著的舒張作用( P ＜0. 01) ，纈草三酯高劑量對離體腸肌具有一定的舒張作用( P ＜ 0． 05) ; 蜘蛛香總纈草三酯提取物高劑量能顯著增加小鼠進入開臂次數(shù)與進入各臂總次數(shù)的百分比( OE) 、在開臂內(nèi)的活動時間與進入各臂的總活動時間的百分比( OT) 值( P ＜0． 01) ，中、高劑量可明顯增加小鼠穿箱次數(shù)和明箱活動時間( P ＜0． 01) ，而總黃酮提取物各劑量對增加小鼠穿箱次數(shù)和明箱活動時間作用不顯著。結(jié)論 蜘蛛香的總黃酮類成分是鎮(zhèn)痛、改善胃腸運動的主要成分，纈草三酯類成分是抗焦慮藥效的主要成分。

關(guān)鍵詞: 蜘蛛香; 總黃酮; 總纈草三酯; 鎮(zhèn)痛; 改善胃腸運動; 抗焦慮

蜘蛛香 Valeriana jatamansi Jones 為敗醬科纈草屬植物，主要分布西南少數(shù)民族地區(qū)，以其根莖及根入藥，具有消食散結(jié)、**止痛、****、**止瀉等功效。其化學(xué)成分主要含揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜類、黃酮類。環(huán)烯醚萜成分中的纈草三酯類是抗焦慮、**催眠、抗腫瘤、解痙等藥效成分之一。蜘蛛香的黃酮類化合物主要有橙皮苷、芹菜素、蒙花苷、蒙花苷異戊酸酯等，具有**、抑菌、抗腫瘤的作用。蜘蛛香的水提液具有的顯著的鎮(zhèn)痛**作

用，提示其活性成分主要集中在強極性段。環(huán)烯醚萜類對實驗大鼠腸易激綜合征( IBS) 具有明顯改善作用，同時也被認為是抗焦慮作用的主要成分?，F(xiàn)有文獻僅見有關(guān)蜘蛛香不同溶媒提取物的藥理學(xué)研究，未見蜘蛛香主要成分富集純化后的提取物的藥效學(xué)評價?，F(xiàn)基于蜘蛛香的總黃酮和纈草三酯類提取物，分別進行了提取物的主要藥效學(xué)研究，可為蜘蛛香活性成分的篩選和制備醫(yī)藥中間體提供參考。蜘蛛香提取物的高架十字迷宮藥理學(xué)研究

1 實驗部分

1． 1 儀器、試藥與動物

 智能熱板儀、恒溫平滑肌槽; 小鼠自主活動儀(上海欣軟信息科技有限公司) ; JH － 2 型肌張力傳感器( 金華雷琪實驗器材有限公司) ; 小鼠高架十字迷宮 ( 上海欣軟信息科技有限公司) 。蜘蛛香藥材( 湖北省恩施州藥材公司，經(jīng)湖北民族學(xué)院朱敏英教授鑒定為敗醬科植物蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones 的干燥根和根莖) ; 元胡止痛片( 廣西世彪藥業(yè)有限公司出品，每片 0． 25 g，批號: 20110907) ; 香砂平胃顆粒( 北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，每袋 10 g，批號: 20110913) ;地片劑( 江西中興漢方藥業(yè)有限公司，每片 2． 5蜘蛛香提取物對小鼠高架十字迷宮藥理行為的影響mg，H36020426) ; 氯化鈉注射液( 浙江康樂藥業(yè)有限公司) ; 其余試劑為分析純。ICＲ 小鼠［成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，動物許可證號 SCXK ( 川)2011 － 24］，♀♂兼用，體重 18 ～ 22g; ♂家兔［四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場，動物許可證號 SCXK( 川) 2008 －14］，體重 2 ～2． 2kg。

1． 2 方法與結(jié)果

1． 2． 1 提取物的制備 取適量蜘蛛香藥材，以料液比 10∶1 用 65%乙醇浸泡 3 h 后，于室溫超聲提取( 30 min × 2) 。用 ADS － 8 樹脂裝柱，*大上樣量42． 3 mg·g－ 1，上樣濃度 1． 692 mg·mL－ 1，先用 30%乙醇除雜，后用 6 BV 的 95% 乙醇洗脫，流速 2 mL·min－ 1。收集洗脫液，減壓濃縮至干，得棕褐色總纈草三酯提取物，以纈草三酯計含量達到 51% ( 出膏率為 26%) 。取適量蜘蛛香藥材，以料液比 1∶20用 60%乙醇浸泡藥材 6 h 后，于 35 ℃超聲提取( 30min × 3) 。用 HPD － 600 樹脂裝柱，上樣濃度 3． 03mg·mL－ 1，上樣容量 24． 24 mg·g－ 1，先用 0． 1 mol·L－ 1HCl 的 10% 乙醇溶液洗脫除雜，直至洗液顏色不再變淺、固形物含量不再增加，后用 0． 1 mol·L－ 1

HCl 的 80% 乙醇溶液，洗脫 5 BV，流速 1 mL·min－ 1，收集洗脫液，減壓濃縮至干，得黃褐色總黃酮提取物，以橙皮苷計，含量達 55%( 出膏率為 39%) 。

1． 2． 2 熱板法鎮(zhèn)痛試驗 篩選痛閾值合格的小鼠，取♀小鼠于給藥前先用 ＲB － 200 型智能熱板儀于55 ± 0． 5 ℃ 分別測定每只小鼠的正常痛閾值［將小鼠放于智能熱板儀上至出現(xiàn)舔后足的所需時間作為痛閾值( s) ，連續(xù) 2 次，間隔30 s，測定平均值即為正常痛閾值］。將舔后足時間 ＜ 5 s 或 ＞ 30 s，或跳躍者不用于此實驗。將痛閾值篩選合格的 80 只♀小鼠，根據(jù)其給藥前正常痛閾值隨機搭配均分為空白組( 等體積純凈水) 、蜘蛛香總黃酮和纈草三酯提取物組( 濃度為 0． 01 g·mL－ 1，高、中、低劑量為 0． 4、

0. 2、0． 1 g·kg－ 1，分別相當(dāng)于生藥量的 1． 54、0． 77、0． 38 g·kg－ 1) 、對 照 組［元 胡 止 痛 片 2 g·kg－ 1( 0． 05 g·mL－ 1) ］; 各受試**均配制成溶液，ig 給

藥。將痛閾值篩選合格的各組小鼠 ig 給藥，連續(xù) 6d，末次給藥后 1、2 h 時再分別用型智能熱板儀測定各小鼠的痛閾值( 痛閾值至60 s，則停止實驗取出小鼠，該小鼠的痛閾值以 60 s 計算) ，于給藥后 30、60、120 min 分別測小鼠的痛閾值。結(jié)果顯示: 與空白組相比，在給藥 30 min 后蜘蛛香黃酮提取物的中、高劑量能顯著提高小鼠痛閾值 ( P ＜0. 01) 。在給藥后 60 min 及 120 min 時低劑量對提高小鼠痛閾值具有一定作用( P ＜0． 05) ，總黃酮中、高劑量及元胡止痛片均能顯著提高小鼠的痛閾值( P ＜0． 01) ; 在給藥后 30 min，纈草三酯中、高劑量對小鼠的熱刺激致痛顯示出一定抑制作用( P ＜0. 05) ，在給藥后 60 min 及 120 min 時高劑量對小鼠熱刺激致痛顯示出顯著抑制作用( P ＜ 0． 01) ; 與對照組相比，黃酮低劑量組在給藥 60 min 和 120 min時對提高小鼠痛閾值具有一定作用( P ＜ 0． 05) ，總黃酮中、高劑量組均能顯著提高小鼠的痛閾值( P ＜0. 01) 。纈草三酯各劑量對小鼠的熱刺激致痛抑制作用不顯著( P ＞0． 05)。蜘蛛香提取物的高架十字迷宮藥理學(xué)研究

1． 2． 3 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗 取 80 只小鼠，♀♂兼用，分組與劑量同“1． 2． 2”項下方法。ig 給藥各組小鼠后 1 h，對每只小鼠 ip 0． 2 mL 0． 7% 冰醋酸溶液，并立即觀察記錄小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)和在 20min 內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。結(jié)果顯示: 與空白組比較，蜘蛛香總黃酮提取物中、高劑量及元胡止痛片均能顯著延長扭體反應(yīng)潛伏期和減少醋酸所引起的小鼠扭體次數(shù)( P ＜0． 01) ; 纈草三酯提取物中、高劑量對延長扭體反應(yīng)的潛伏期和減少醋酸所引起的小鼠扭體次數(shù)具有一定作用( P ＜0． 05) 。與對照組比較，蜘蛛香總黃酮提取物高劑量能顯著延長扭體反應(yīng) 的潛伏期和減少醋酸所引起的小鼠扭體次數(shù)( P ＜0． 01) ，纈草三酯提取物各劑量對延長扭體反應(yīng)的潛伏期和減少醋酸所引起的小鼠扭體次數(shù)作用不顯著( P ＞0． 05)。

1． 2． 4 小鼠腸蠕動試驗

取 80 只小鼠，均分為空白組( 等體積生理鹽水) 、蜘蛛香總黃酮和纈草三酯提取物高、中、低劑量組、對照組( 香砂平胃顆粒20 g·kg－ 1，濃度為 1 g·mL－ 1) 。連續(xù) ig 9 d，每天 1次。末次給藥加 6% 的炭末，給藥后 10 min 脫頸處死小鼠，分離腸系膜，剪取上端至幽門、下端至回盲部的腸管，將小腸輕輕擺成直線，分別測量其全長和炭末推進長度。炭末推進率 = 炭末在腸內(nèi)推進距離( cm) /小腸全長( cm) × 100%。結(jié)果顯示: 與空白組比較，蜘蛛香總黃酮和纈草三酯提取物各劑量及香砂平胃顆粒均能顯著增加小腸炭末推進率( P ＜0． 01) ; 與對照組比較，黃酮提取物中、高劑量和纈草三酯提取物高劑量能顯著增加小腸炭末的推進率( P ＜0． 01) 。蜘蛛香提取物對小鼠高架十字迷宮藥理行為的影響

1． 2． 5 對家兔離體腸肌的影響

處死家兔后立即解剖，將腸管放入常溫的臺氏液中清洗，排盡腸的內(nèi)容物。每組 5 只兔子共 10 個腸肌標(biāo)本進行實驗。空白組( 等體積生理鹽水) ; 蜘蛛香總黃酮提取物高劑量組( 0． 4 g·kg－ 1) ; 纈草三酯提取物高劑量組( 0． 4 g·kg－ 1) ; 對照組( 香砂平胃顆粒 20 g·kg－ 1) 。每次取長約 1． 5 ～2. 0 cm 的腸管，一端固定在麥?zhǔn)显」苌?，另一端連接在張力換能器上，恒溫37 ℃，通空氣，每分鐘 40 ～ 60 個氣泡，負荷張力約 1 ～ 2 g。記錄腸管的收縮活動。待腸管收縮活動穩(wěn)定后，描記一段正常收縮曲線。向浴槽內(nèi)加入受試藥液，觀察**的作用，描記曲線。結(jié)果顯示: 與空白組比較，蜘蛛香總黃酮提取物高劑量及香砂平胃顆粒對離體腸肌均有顯著的舒張作用( P ＜ 0． 01) ，纈草三酯提取物高劑量對離體腸肌具有一定的舒張作用( P ＜0． 05) 。與對照組比較，黃酮提取物高劑量對離體腸肌均有顯著的舒張作用( P ＜ 0． 01) ，纈草三酯高劑量對離體腸肌具有一定的舒張作用( P ＜0. 05) 

1． 2． 6 對小鼠高架十字迷宮行為的影響

將 80只小鼠隨機均分成空白組( 等體積生理鹽水) 、蜘蛛香總黃酮和纈草三酯提取物劑量組( 按“1. 2. 1”項下劑量) 、對照組( 泮 2 mg·kg－ 1) 。各組連續(xù) ig給藥或生理鹽水 10 d，第 10 d，給藥組給藥 1 h 后，對照組給藥 0． 5 h 后進行行為測試。將小鼠單獨放入動物盒中，自由活動 5 min ，測試時將小鼠置于高架十字迷宮中央?yún)^(qū)，分別記錄 5 min 內(nèi)小鼠進入開臂次數(shù)和停留時間、進入閉臂次數(shù)和停留時間。以進入開臂次數(shù)與進入各臂總次數(shù)的百分比( OE) 、在開臂內(nèi)的活動時間與進入各臂的總活動時間的百分比( OT) 作為抗焦慮作用的考察指標(biāo)。結(jié)果顯示: 與空白組比較，蜘蛛香總纈草三酯提取物低、中、高劑量及地泮均可明顯增加小鼠 OT 和 OE 值( P ＜0. 01) ，而總黃酮提取物對小鼠高架十字迷宮行為的影響不顯著( P ＞0． 05) ; 與對照組比較，蜘蛛香總纈草三酯提取物高劑量能顯著增加小鼠 OT 和 OE值( P ＜0． 01) ，提示纈草三酯類成分是關(guān)聯(lián)抗焦慮藥效的有效成分 。

1． 2． 7 對小鼠明暗箱行為的影響

分組及**劑量同“1． 2． 6”項，測試時將小鼠置于明暗箱的明箱中央，頭朝暗箱，釋放后記錄下 5 min 內(nèi)小鼠的穿箱次數(shù)及在明箱中活動的時間。結(jié)果顯示: 與空白組相比，蜘蛛香總纈草三酯提取物和地泮可明顯增加小鼠穿箱的次數(shù)和明箱中活動的時間( P ＜0. 01) ，總黃酮提取物高劑量對增加小鼠穿箱次數(shù)和明箱中活動的時間具有一定作用( P ＜ 0． 05) ; 與對照組比較，蜘蛛香總纈草三酯提取物中、高劑量可明顯增加小鼠穿箱次數(shù)和明箱中活動的時間( P ＜0. 01) ，而總黃酮提取物各劑量對增加小鼠穿箱次數(shù)和明箱中活動時間作用不顯著( P ＞ 0． 05) ，提示纈草三酯提取物較黃酮類提取物具有顯著抗焦慮作用 。蜘蛛香提取物的高架十字迷宮藥理學(xué)研究

2 討論

熱板法和醋酸扭體鎮(zhèn)痛實驗是研究鎮(zhèn)痛效應(yīng)的經(jīng)典方法; 炭末法和家兔離體腸肌用于探討對胃腸運動影響的實驗，反應(yīng)靈敏、操作簡單; 高架十字迷宮是篩選抗焦慮**常用的非條件反射模型，明、暗箱是用于篩選抗焦慮藥的一種簡單易行的方法。文中針對每種藥理學(xué)實驗選取兩種評價手段，這對合理、科學(xué)地評價其藥理學(xué)反應(yīng)具有重要意義。研究顯示: 蜘蛛香具有鎮(zhèn)痛藥效的主要成分是黃酮類，具有**神經(jīng)抑制、抗焦慮藥效的主要成分是纈草三酯類，據(jù)此推測也有可能是兩種組分一定比例的組分復(fù)合物，但具體的活性成分或組分還有待研究。