摘要 :目的 觀察明暗箱實驗對小鼠避暗潛伏期及錯誤次數(shù)的影響 ,并初步探討其機制 。 方法 按分層隨機區(qū)組設計將小鼠分為 6 組 ( n = 10) :生理鹽水組 (NS 組) ,一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 組 (S 組) ,*** (5 mg· kg - 1 、10 mg·kg - 1 、20 mg· kg - 1) 組 ( K 5 、K 10 、K 20組) ,一葉秋堿 (1 mg· kg - 1) + *** (20 mg· kg - 1 ) 組 (SK組) 。用避暗實驗測定給藥后 24 h 小鼠的避暗潛伏期及錯誤次數(shù) 。 結果 與 NS 組相比 ,K 10 、K 20組的避暗潛伏期縮短 ( P 均 < 0. 01) 、錯誤次數(shù)增多 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) ,似呈劑量依賴性 。與 K 20組相比 ,SK組的避暗潛伏期延長 ( P < 0. 01) 、錯誤次數(shù)減少 ( P < 0. 01) ,但不能恢復至 NS 組水平 ( P < 0. 01 , P < 0. 05) 。 結論 GABAA 受體部分介導了***對小鼠的記憶損害作用 。
關鍵詞 :*** ;小鼠 ;記憶 ;避暗實驗
氯酮 (ketamine ,K) 是臨床常用的靜脈*** ,具有明顯的鎮(zhèn)痛作用 1 - 2 ,在術中及術后鎮(zhèn)痛中應用比較廣泛 。近年研究發(fā)現(xiàn) ,***對認知功能亦
有影響 3 ,但是其作用機制尚不清楚 。本研究利用避暗實驗 ,并通過預先皮下注射 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿 ( securinine ,S) 4 ,觀察不同劑量***對小鼠記憶的影響 ,探討***是否通過GABAA 受體而影響記憶 。
1 材料和方法
1. 1 實驗動物 KM 小鼠 (清潔級 ,徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供 ,合格證號 SYXK(蘇) 2002 - 0038) ,體重 22～25 g ,自由攝食飲水 。實驗前 3 天使小鼠熟悉實驗室環(huán)境 ,每日 9 :00～15 :00 在隔音的環(huán)境中進行避暗實驗 。
1. 2 ** 鹽酸氯酮注射液購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司 (批號 03021032) ,硝酸一葉秋堿注射液購自江蘇前進制藥廠 (批號 041210) ,均以生理鹽水 (NS) 稀釋至所需濃度 。
1. 3 實驗儀器
上海欣軟科技公司可提供避暗實驗系統(tǒng) .
1. 4 動物分組及處理 按分層隨機區(qū)組設計將小鼠分組 ,使各組小鼠雌雄比例 、平均體重基本相同 。將小鼠分為 6 組 :NS 組 、一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 組 (S組) 、不同劑量的*** (5 mg· kg - 1 、10 mg· kg - 1 、20 mg· kg - 1 ) 組 ( K 5 、K 10 、K 20 組) 和一葉秋堿 (1 mg·kg - 1 ) + *** (20 mg· kg - 1) 組 (SK組) ,每組均為 10只 。在訓練前 10 min ,S 組 、SK 組皮下注射一葉秋堿 。訓練前 5 min ,各組分別皮下注射生理鹽水或*** 。所有的**和 NS 均按照 10 ml· kg - 1 的劑量給予 。
1. 5 避暗實驗 避暗實驗參照文獻。實驗裝置分為明暗兩室 ,兩室之間有一直徑為 3 cm 大小的圓洞 ,暗室底部銅柵接電 。訓練時先將小鼠放入反應箱中適應 3 min ,然后暗室底部銅柵通 40 V、50 Hz 交流電 。將小鼠背對洞口放入明室 ,小鼠進入暗室則受到電擊 。訓練時避暗潛伏期大于 180 s 者棄去不用 。 24 h 后再次將小鼠放入明室 ,記錄 5 min 內(nèi)**次進入暗室的時間 (潛伏期) 和進入次數(shù) (錯誤次數(shù)) 。如果 5 min 時小鼠仍未進入暗室 ,錯誤次數(shù)記為 0 次 ,潛伏期記為 300 s。
1. 6 統(tǒng)計學處理 所有的數(shù)據(jù)均以 € x ±s 表示 ,用SPSS 11. 5 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理 ,方差分析進行顯著性差異檢驗 ,兩兩比較用 LSD 檢驗 , P < 0. 05 為有顯著性差異 。
2 結 果
小鼠避暗實驗結果見表 1。
與 NS 組比較 : 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01 ;與 K 20 組比較 :△△P < 0. 01
與 NS 組相比 : K 5 組錯誤次數(shù)略增多 、潛伏期略縮短 ,差異無顯著性 ( P > 0. 05) ; K 10 、K 20 組的錯誤次數(shù)明顯增多 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) ,避暗潛伏期縮短( P 均 < 0. 01) ,似呈劑量依賴性 。與 K 20 組相比 :SK組的錯誤次數(shù)明顯減少 ( P < 0. 01) 、避暗潛伏期明顯延長 ( P < 0. 01) ,有顯著性差異 ,但不能恢復至 NS組水平 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) 。
3 討 論
全身麻醉期間可能發(fā)生術中知曉 ,曾有報道 ,56. 3 %的創(chuàng)傷后情緒紊亂癥患者曾經(jīng)有過術中知曉的經(jīng)歷[6 ] ,若手術中不當?shù)恼勗捇蛱弁创碳さ却媪粲谟洃浿?nbsp;,則可能對其以后的精神行為或術后疼痛帶來負面影響[7 ] ,因此研究全身麻醉中的記憶是非常有意義的 。γ- 氨基丁酸 ( GABA) 是**神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì) ,對學習與記憶具有重要作用[8 ] 。因此我們利用 GABAA 受體的特異阻斷藥一葉秋堿作為工具藥 ,來探討***對記憶的影響及其與 GABAA 受體的關系 。
人和動物的心理活動是無法直接觀察到的 ,只能根據(jù)觀察到的刺激反應來推測腦內(nèi)發(fā)生的過程 ,對腦內(nèi)記憶過程的研究只能從人類或動物學習或執(zhí)行某種任務后間隔一段時間 ,測定他們的操作成績或反應時間來評價記憶效果 。避暗實驗是利用鼠類的嗜暗習性而設計的 ,是目前常用的測定鼠類記憶成績的方法之一 ,操作簡單易行 ,動物間的差異較小[5 ] ,因此我們本研究選擇了避暗實驗 。
在本實驗中 ,單獨給予 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿 (1mg· kg - 1 ) 后 ,與生理鹽水組相比 ,小鼠的錯誤次數(shù)和避暗潛伏期均無顯著差異 ,說明單獨應用此劑量的一葉秋堿對小鼠的記憶并無明顯影響 。單獨給予較大劑量的*** (10 mg· kg - 1 ,20 mg· kg - 1 ) ,小鼠的避暗潛伏期明顯縮短 、錯誤次數(shù)明顯增加 ,并且似呈劑量依賴關系 ,說明***對小鼠的記憶有損害作用 。而在給予*** (20 mg· kg - 1 ) 之前 ,預先用一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 進行處理 ,小鼠的錯誤次數(shù)則較單獨應用*** (20 mg· kg - 1 ) 明顯減少 、避暗潛伏期明顯延長 ,但是未能恢復至生理鹽水組水平 ,說明一葉秋堿可以部分逆轉(zhuǎn)***對記憶的損害作用 ,提示 GABAA 受體介導了***損害記憶的作用 。至于***對記憶的損害作用有無其他機制 ,尚待進一步研究 。
