摘要：【目的】比較不同劑量龍眼果肉醇提物和水提物對(duì)東莨菪堿所致記憶獲得性障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，初步解釋龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶的作用機(jī)制。【方法】分析龍眼果肉醇提物和水提物中主要活性物質(zhì)含量。將無特定病原體（SPF 級(jí)）雄性昆明小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1），共6 組，連續(xù)灌胃28 d 后，空白組腹腔注射等量生理鹽水，各試驗(yàn)組腹腔注射東莨菪堿造模，0.5 h 后，以潛伏期和穿梭次數(shù)為考察指標(biāo)，采用避暗試驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，作為習(xí)得成績；24 h 后再次進(jìn)行避暗試驗(yàn)，對(duì)小鼠進(jìn)行記憶保持測(cè)試，測(cè)試結(jié)束后摘眼球取血，脫頸致死，取腦組織進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)。測(cè)定腦組織的膽堿類（乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶choline acetyltransferase，ChAT 和乙酰膽堿酯酶acetylcholinesterase，AChE 活力）及抗氧化相關(guān)指標(biāo)（超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量），血清中抗氧化相關(guān)指標(biāo)（SOD、GSH-Px 活力及MDA 含量）。通過綜合比較各組間行為學(xué)試驗(yàn)指標(biāo)、腦組織、血清生化指標(biāo)，判斷龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用效果及作用機(jī)制?！窘Y(jié)果】分析龍眼果肉提取物成分發(fā)現(xiàn)，龍眼果肉水提物主要為多糖及蛋白質(zhì)，醇提物除含有糖類外，還含有較豐富的酚類、黃酮類和磷脂物質(zhì)，其中，醇提物中總酚、總黃酮、總磷脂含量顯著高于水提物的（P＜0.05）。行為學(xué)試驗(yàn)表明，模型組小鼠在避暗試驗(yàn)中5 min 內(nèi)穿梭次數(shù)為2.89 次，是正常小鼠的6.09 倍，高劑量龍眼果肉醇提物和水提物組小鼠穿梭次數(shù)分別為0.75 次和0.56 次，與正常組無顯著差異；癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期僅為正常組的0.43 倍,與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期（P＜0.05），且存在一定劑量效應(yīng)關(guān)系，其中龍眼果肉醇提物和水提物高劑量組小鼠的避暗潛伏期分別為289.18 s、290.80 s，與正常組相比無顯著差異（P＞0.05）。生化指標(biāo)方面，與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠腦組織中ChAT 活力，顯著降低AChE 活力（P＜0.05），且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。相同劑量時(shí)，龍眼果肉水提物效果優(yōu)于醇提物，其中龍眼果肉醇提物高劑量組，龍眼果肉水提物低、高劑量組小鼠腦組織中ChAT 活力基本恢復(fù)正常水平；在抗氧化水平方面，與模型組相比，龍眼果肉醇提物高劑量組顯著增加癡呆小鼠腦組織和血清中SOD、GSH-Px 活力，顯著降低MDA 含量（P＜0.05），基本達(dá)到正常水平，效果優(yōu)于同等劑量的龍眼果肉水提物。
【結(jié)論】龍眼果肉水提物和醇提物均可改善東莨菪堿誘導(dǎo)記憶獲得性障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，但二者的作用機(jī)制可能存在差異，龍眼果肉水提物主要通過調(diào)節(jié)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用的物質(zhì)基礎(chǔ)可能為多糖或糖蛋白；醇提物則主要通過提高機(jī)體抗氧化活力改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用物質(zhì)可能為多酚、黃酮、磷脂等。
關(guān)鍵詞：龍眼果肉；東莨菪堿；學(xué)習(xí)記憶功能；乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶; 抗氧化
1.1主要儀器
避暗系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司），SB-5200TD 超聲儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），F(xiàn)DU-2110 真空冷凍干燥機(jī)（東京理化器械株
式會(huì)社），EYELA CA-2600 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會(huì)社），UV1800 型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津有限公司），多功能熒光分析儀 FluoroskanAscent FL（美國Thermo Fisher Scientific 公司），HZQQX 型全溫振蕩器（哈爾濱東聯(lián)電子開發(fā)有限公司），冷凍離心機(jī)（美國Thermo Electron 公司），DS-1高速組織搗碎機(jī)（ 上海標(biāo)本模型廠） 、Agilent Technologies 1260 Series、6890N-5975B GC-MS （美國Agilent 公司）。
1.2 動(dòng)物分組及處理
將72 只小鼠隨機(jī)分成6 組，每組12 只，分別為：空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組（150mg·kg-1）、龍眼果肉醇提物高劑量組（300 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組（150 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物高劑量組（300 mg·kg-1）。各劑量以提取物干基計(jì)，參照龍眼干果肉每日攝取量（9—15 g）基于人-動(dòng)物劑量轉(zhuǎn)換公式[25]得到，并參考文獻(xiàn)[9]做一定調(diào)整。各組均按10 mL·kg-1·b.w.-1 灌胃給藥（空白組和模型組灌胃生理鹽水），每天一次，連續(xù)28 d。在*后一次給藥1 h 后，除空白組腹腔注射生理鹽水外，其他組均腹腔注射東莨菪堿（3 mg·kg-1·b.w.-1）制備小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型，并于注射20 min 后進(jìn)行避暗試驗(yàn)。
1.3 避暗試驗(yàn)
方法參考DONG 等[26]進(jìn)行并做一些改進(jìn)，該試驗(yàn)分為習(xí)得測(cè)試（Acquisition trial）和記憶保持測(cè)試（Retention trial）兩部分。小鼠灌胃第26 天起，連續(xù)2 d 在同一時(shí)間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)5 min。第28 天腹腔注射東莨菪堿20 min 后開始習(xí)得測(cè)試，將小鼠背對(duì)拱門放入明箱后，給暗室不銹鋼柵欄通以0.3 mA 電流持續(xù)5 min，由于小鼠具有趨暗的習(xí)性會(huì)由明室向暗室探索，小鼠一進(jìn)入暗室即受電擊，其正確反應(yīng)是回到明室，記錄小鼠第1 次進(jìn)入暗室的時(shí)間即為避暗潛伏期（step-through latency），步入潛伏期大于5 min 者棄去不用,5 min 內(nèi)小鼠進(jìn)入暗室的次數(shù)即為穿梭次數(shù)（shuttle number）,作為習(xí)得成績；24 h 后對(duì)小鼠進(jìn)行記憶保持測(cè)試，記錄小鼠5 min 內(nèi)的潛伏期及進(jìn)入暗室的次數(shù)（即穿梭次數(shù)），作為記憶成績，5 min 內(nèi)未進(jìn)入暗室的小鼠其潛伏期按300 s 計(jì)，穿梭次數(shù)計(jì)0 次。
1.4 小鼠血漿、腦組織內(nèi)生化指標(biāo)檢測(cè)行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束后，乙醚麻醉小鼠，摘眼球取血，全血離心后取血清；脫頸椎處死小鼠，迅速于冰上斷頭取腦，加9 倍體積（m/V）的冰生理鹽水進(jìn)行勻漿，4℃離心（3 000 r/min，10 min），取上清液，即為10%組織勻漿。分別按照試劑盒表明書測(cè)定腦組織勻漿中ChAT 和AChE 活力，腦組織勻漿和血清中SOD、GSH-Px 活力及MDA 含量，采用考馬斯亮蘭法測(cè)定組織蛋白含量。
1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
用SPSS19.0 軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用單因子方差分析（one way ANOVA），顯著性用LSD 法及Dunnett’s 檢驗(yàn)（P＜0.05），所有數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ±sd）表示。
1.6小鼠避暗試驗(yàn)行為表現(xiàn)
不同劑量龍眼果肉醇提物和水提物對(duì)東莨菪堿致衰小鼠在避暗試驗(yàn)中學(xué)習(xí)記憶能力的影響見圖1。在習(xí)得測(cè)試時(shí)，各組間潛伏期與穿梭次數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）。在記憶保持測(cè)試時(shí)，與空白組相比，模型組潛伏期由300 s 縮短至130.83 s，穿梭次數(shù)顯著增加至2.44 次（P＜0.05），表明腹腔注射東莨菪堿使小鼠產(chǎn)生學(xué)習(xí)記憶障礙。與模型組相比，龍眼果肉各劑量醇提物和水提物組潛伏期均顯著延長（P＜0.05），穿梭次數(shù)減少（P＜0.05），且同一提取物的高劑量組比低劑量組效果顯著，醇提物和水提物高劑量組的潛伏期分別為289.18 s、290.80 s，穿梭次數(shù)分別為0.75、0.65，與空白組相比均無顯著差異（P＞0.05），表明龍眼果肉醇提物與水提物均有改善癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶的能力，高劑量組處理小鼠的記憶能力已基本恢復(fù)到正常小鼠水平。