【摘要】　目的　探討銀杏內(nèi)脂Ｂ（Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ　Ｂ，ＧＢ）對(duì)大鼠缺氧模型焦慮樣行為的改善作用。方法?。常吨唬樱校萍?jí)ＳＤ大鼠隨機(jī)分為平原對(duì)照組、高原缺氧組、ＧＢ干預(yù)組，每組１２只。依托高原人工實(shí)驗(yàn)艙平臺(tái)，以平原常氧條件飼養(yǎng)大鼠為平原對(duì)照組，以高原人工實(shí)驗(yàn)艙內(nèi)模擬６０００ｍ高原缺氧環(huán)境，高原缺氧組和ＧＢ干預(yù)組在艙內(nèi)６ｄ，制造高原缺氧模型，其中ＧＢ干預(yù)組在進(jìn)艙前４ｄ以ＧＢ灌胃給藥，每天給藥劑量為１２０ｍｇ／ｋｇ。采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（ｏｐｅｎ?。妫椋澹欤洹。簦澹螅?，ＯＦＴ）和高架十字迷宮（ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｐｌｕｓ?。恚幔?，ＥＰＭ）實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察ＧＢ對(duì)缺氧導(dǎo)致的大鼠焦慮行為的影響。結(jié)果　在ＯＦＴ中，平原對(duì)照組大鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)域時(shí)間、次數(shù)以及運(yùn)動(dòng)總路程顯著高于高原缺氧組，在ＥＰＭ 試驗(yàn)中進(jìn)入開(kāi)臂時(shí)間和次數(shù)百分比也顯著高于高原缺氧組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。在ＯＦＴ和ＥＰＭ 試驗(yàn)中，ＧＢ干預(yù)組的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)較高原缺氧組有顯著的升高，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論　預(yù)先給予ＧＢ可以有效緩解高原缺氧導(dǎo)致的大鼠焦慮樣行為。

由于高原特有的缺氧、低氣壓、強(qiáng)紫外線等一系列環(huán)境條件，急進(jìn)高原過(guò)程中士兵常常會(huì)伴隨有生理和心理的應(yīng)激反應(yīng)。其中心理應(yīng)激會(huì)使人產(chǎn)生焦慮、抑郁甚至精神分裂等情緒變化，嚴(yán)重影響**的戰(zhàn)斗力。因此研究能夠有效預(yù)防或治急性缺氧條件所致焦慮樣情緒的藥十分重要。

銀杏內(nèi)酯Ｂ（Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ?。?，ＧＢ）是銀杏葉提取物中的主要成分之一，成份主要為萜類內(nèi)酯，已有研究表明，在急性缺氧條件下，ＧＢ有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的作用，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，緩解大鼠的認(rèn)知功能障礙，本研究作者推測(cè)ＧＢ的這種保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用可能也會(huì)改善缺氧所致焦慮行為的產(chǎn)生。但另一報(bào)道顯示雖然銀杏葉提取復(fù)合物（成分包括銀杏內(nèi)酯Ａ、Ｂ、Ｃ和白果內(nèi)酯）在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出抑制小鼠焦慮樣行為的作用，但這種抗焦慮作用主要是由銀杏內(nèi)酯Ａ 提供，而不是ＧＢ［７］。為了探討ＧＢ是否有抗焦慮的作用，本研究使用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（ｏｐｅｎ?。妫椋澹欤洹。簦澹螅?，ＯＦＴ）和高架十字迷宮（ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｐｌｕｓ?。恚幔?，ＥＰＭ）實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)急性缺氧條件下的大鼠焦慮樣行為，以期為缺氧所致焦慮的預(yù)防和治提供新的藥選擇。

１　材料和方法

１．１　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ＳＰＦ級(jí)成年雄性ＳＤ 大鼠３６只，體質(zhì)量（２００±２０）ｇ，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：２０１１１１２５００８。

１．２　試劑與儀器

高原人工實(shí)驗(yàn)艙（新疆**總醫(yī)院自主建造）；ＥＰＭ 實(shí)驗(yàn)儀器（型號(hào)：ＸＲ－ＸＧ２０1，上海欣軟信息科技有限公司）；ＯＦＴ實(shí)驗(yàn)儀器（型號(hào)：ＸＲ－ＸＺ３０１，上海欣軟信息科技有限公司）；ＳｕｐｅｒＭａｚｅ動(dòng)物行為學(xué)視頻分析系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司）；ＧＢ（貨號(hào)：Ｃ３１Ｊ６Ｇ２０１４，純度＞９８％，上海源葉生物科技有限公司）。

１．３　實(shí)驗(yàn)ＳＤ大鼠飼養(yǎng)方法及分組將ＳＤ大鼠在新環(huán)境下先飼養(yǎng)適應(yīng)３ｄ。所有大鼠均飼養(yǎng)在動(dòng)物房中，保持室內(nèi)溫度（２５±１）℃，每天１２ｈ晝夜交替，給予同種飼料喂養(yǎng)，可自由進(jìn)食、飲水，采用玉米粒做墊料，每?jī)商旄鼡Q一次。

實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠分為３組，分別為平原對(duì)照組、高原缺氧組、ＧＢ干預(yù)組，各１２只。其中ＧＢ干預(yù)組大鼠在進(jìn)入高原人工實(shí)驗(yàn)艙之前每天固定時(shí)間給與１２０ｍｇ／ｋｇ劑量的ＧＢ灌胃，連續(xù)給藥４ｄ后與高原缺氧組大鼠一起進(jìn)入高原人工實(shí)驗(yàn)艙。平原對(duì)照組大鼠一直在動(dòng)物房中常規(guī)條件飼養(yǎng)。

１．４　模擬急進(jìn)高原條件

將ＧＢ干預(yù)組和高原缺氧組大鼠同時(shí)置于特殊環(huán)境人工實(shí)驗(yàn)艙內(nèi)，以２５ｍ／ｓ的速度快速升至６０００ｍ海拔，自然２４ｈ晝夜交替，并不間斷的以５．５Ｌ／ｍｉｎ的速度注入新鮮空氣以提供飼養(yǎng)動(dòng)物所需的氧氣，同時(shí)排出二氧化碳，艙內(nèi)溫度維持在（２４±２）℃，濕度４０％～５０％，大鼠自由攝進(jìn)食物和水。實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠在高原暴露期間的飲食、活動(dòng)、情緒等狀態(tài)，在艙內(nèi)連續(xù)暴露６ｄ后出艙，進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)。

１．５　動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，徹底清潔實(shí)驗(yàn)裝置，采用窗簾將ＯＦＴ和ＥＰＭ 與外界環(huán)境分隔開(kāi)，室內(nèi)暗光（以１．５ｍ距離處能區(qū)分大鼠細(xì)微活動(dòng)的較低亮度為準(zhǔn)）并保持恒亮，室溫２０℃左右，測(cè)試過(guò)程中保持周圍環(huán)境安靜。設(shè)置好相關(guān)程序參數(shù)，其中攝影記錄為延遲５ｓ記錄，共記錄３００ｓ。大鼠出艙后將其放置在實(shí)驗(yàn)室半小時(shí)以適應(yīng)環(huán)境。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，將大鼠背對(duì)實(shí)驗(yàn)者從籠中取出（每次一只大鼠），放入曠場(chǎng)以及十字迷宮裝置的中心，實(shí)驗(yàn)者立刻離開(kāi)，使用SuperMaze動(dòng)物行為軌跡跟蹤系統(tǒng)采集大鼠在３００ｓ內(nèi)的活動(dòng)信息。每只大鼠在完成測(cè)試后，使用７５％酒精將設(shè)備擦洗干凈后，再進(jìn)行下一只大鼠的測(cè)試。

１．６　實(shí)驗(yàn)中需要記錄的評(píng)價(jià)指標(biāo)

ＯＦＴ實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)焦慮心理時(shí)，其對(duì)開(kāi)闊環(huán)境和新異環(huán)境中的恐懼和探究的矛盾心理特性會(huì)反應(yīng)在行為學(xué)上，表現(xiàn)為焦慮越嚴(yán)重，就越傾向于在周邊區(qū)域活動(dòng)，以獲得一種安quan感。因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)越多，在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)的時(shí)間越長(zhǎng)則說(shuō)明動(dòng)物的焦慮情緒越低。觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)總路程（ｃｍ）、進(jìn)入中心區(qū)域時(shí)間（ｓ）、進(jìn)入中心區(qū)域次數(shù)（ｎ）。

ＥＰＭ 實(shí)驗(yàn)主要是利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究和對(duì)高懸開(kāi)臂的恐懼形成矛盾心理來(lái)反應(yīng)動(dòng)物的焦慮狀態(tài)。大鼠進(jìn)入開(kāi)臂時(shí)間和次數(shù)越多，說(shuō)明大鼠焦慮程度越低，反之則說(shuō)明其焦慮程度越高。觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)總路程（ｃｍ）、開(kāi)臂時(shí)間百分比（％）、開(kāi)臂次數(shù)百分比（％）。

１.７　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用ＳＰＳＳ?。保叮敖y(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（珚ｘ±ｓ）表示，兩組間比較采用ｔ檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，Ｐ＜０．０５為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

２　結(jié)果

２．１?。希疲越Y(jié)果

由動(dòng)物行為軌跡跟蹤系統(tǒng)采集的大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡可以看到高原缺氧組大鼠相較于平原對(duì)照組大鼠在中央?yún)^(qū)域的運(yùn)動(dòng)軌跡明顯減少，而ＧＢ干預(yù)組大鼠在中央?yún)^(qū)域的活動(dòng)時(shí)間則和平原對(duì)照組相近，見(jiàn)圖１。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后可以看出在到運(yùn)動(dòng)總路程、進(jìn)入中心區(qū)域時(shí)間和次數(shù)上，高原缺氧組顯著低于平原對(duì)照組和ＧＢ干預(yù)組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｆ＝１０．９９１，Ｐ＜０．０１），而平原對(duì)照組和ＧＢ干預(yù)組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５），ＧＢ干預(yù)組與高原缺氧組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），見(jiàn)表１。以上結(jié)果說(shuō)明高原缺氧環(huán)境會(huì)導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生焦慮樣行為，而ＧＢ的預(yù)給藥可以改善大鼠的焦慮狀態(tài)。

２．２ ＥＰＭ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由動(dòng)物行為軌跡跟蹤系統(tǒng)采集的大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡可以看出高原缺氧組大鼠相較于平原對(duì)照組大鼠在開(kāi)臂

區(qū)的運(yùn)動(dòng)軌跡明顯減少，而ＧＢ干預(yù)組大鼠在開(kāi)臂區(qū)的活動(dòng)時(shí)間則和平原對(duì)照組相近，見(jiàn)圖２。運(yùn)動(dòng)總路程、開(kāi)臂區(qū)活動(dòng)時(shí)間百分比和進(jìn)入次數(shù)百分比上，高原缺氧組顯著低于平原對(duì)照組和ＧＢ干預(yù)組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｆ＝１１．０１６，Ｐ＜０．０５），但平原對(duì)照組與ＧＢ 干預(yù)組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５），ＧＢ干預(yù)組與高原缺氧組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），見(jiàn)表２。

３　討論

焦慮是動(dòng)物個(gè)體在面對(duì)潛在威脅和壓力時(shí)產(chǎn)生的一種正常情緒反應(yīng)，人體在急進(jìn)高原后，由于低壓、缺氧、強(qiáng)紫外線等環(huán)境的變化會(huì)造成一系列應(yīng)激反應(yīng)，從而產(chǎn)生焦慮、抑郁的心理應(yīng)激改變，會(huì)對(duì)正常的生活和工作造成負(fù)面影響。有研究表明高原駐防官兵中存在大量焦慮、抑郁等心理癥狀的個(gè)體，并且這種焦慮和抑郁狀態(tài)可增加慢性高原病的的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響官兵的身心健康。近年來(lái)，傳統(tǒng)中藥在抗焦慮方面的作用得到越來(lái)越多的關(guān)注，有研究報(bào)道，紅景天可通過(guò)增高海馬神經(jīng)細(xì)胞中的５－羥色胺含量，從而降低缺氧刺激下大鼠的焦慮樣行為。另一中成藥芪參復(fù)康膠囊也被證明有明顯的抗焦慮抗抑郁的作用，效果甚至優(yōu)于紅景天。而本文則選用了另一種傳統(tǒng)中藥ＧＢ，并對(duì)其潛在的抗焦慮作用進(jìn)行了初步研究。

本研究采用ＯＦＴ和ＥＰＭ 兩個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)動(dòng)物焦慮樣行為。ＯＦＴ的運(yùn)動(dòng)總路程反應(yīng)大鼠的興奮性，本實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)ＧＢ干預(yù)組的運(yùn)動(dòng)總路程顯著高于高原缺氧組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），表明ＧＢ能改善缺氧造成的大鼠興奮性下降。而ＥＰＭ 實(shí)驗(yàn)中，高原缺氧組大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的時(shí)間和次數(shù)顯著低于平原對(duì)照組和ＧＢ干預(yù)組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），說(shuō)明ＧＢ緩解了大鼠的焦慮情緒。本研究通過(guò)以上行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步探討了ＧＢ對(duì)缺氧導(dǎo)致的大鼠焦慮樣行為的改善作用，但本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)仍存在一定問(wèn)題，首先作者參考之前研究結(jié)果只選用了１２０ｍｇ／ｋｇ這一個(gè)*大用藥劑量，而沒(méi)有進(jìn)行**梯度的設(shè)定，不能說(shuō)明ＧＢ的抗焦慮效果是否有**劑量依賴性。其次，臨床上對(duì)于病理性焦慮的治常采用苯二氮卓類藥，如地泮，該類藥是通過(guò)作用于抑制性遞質(zhì)γ－氨基丁酸Ａ 受體的ＺＡ位點(diǎn)發(fā)揮其抗焦慮效應(yīng)。因此在動(dòng)物焦慮模型的相關(guān)研究中常使用***做為陽(yáng)性對(duì)照藥，而本實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組，降低了本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。以上問(wèn)題都是接下來(lái)研究中需要改進(jìn)的。

缺氧導(dǎo)致的焦慮是一個(gè)復(fù)雜的病理生理變化，牽涉到神經(jīng)生化、神經(jīng)***等多方面的變化，其中神經(jīng)遞質(zhì)５－羥色胺在焦慮動(dòng)物模型中有顯著的表達(dá)變化，其參與焦慮的產(chǎn)生由不同的受體介導(dǎo)。有研究表明ＧＢ可以阻斷５－ＨＴ（３）Ａ 受體，提示這可能是ＧＢ發(fā)揮抗焦慮作用的機(jī)制之一。在中神經(jīng)系統(tǒng)中，參與情緒調(diào)節(jié)的腦區(qū)，包括杏仁核、前額皮質(zhì)、丘腦、海馬和扣帶回等腦部結(jié)構(gòu)。其中，海馬是參與情緒調(diào)節(jié)非常重要的腦區(qū)，在情緒變化、應(yīng)激等信息整合過(guò)程中起主要作用，同時(shí)也是大量研究者觀察神經(jīng)可塑性變化的腦區(qū)。本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在低壓低氧條件下，ＧＢ可以改善大鼠的認(rèn)知功能障礙，提示其潛在的保護(hù)海馬神經(jīng)元作用，這可能也是ＧＢ具有抗焦慮作用的原因之一。綜上所述，本研究初步探討了ＧＢ對(duì)缺氧導(dǎo)致的大鼠焦慮樣行為的改善作用，為進(jìn)一步探討ＧＢ抗焦慮機(jī)制提供了穩(wěn)定的動(dòng)物模型和藥劑量參考。