引言

對(duì)于嚙齒類動(dòng)物視覺功能的檢測(cè),主要依靠視網(wǎng)膜解剖檢查、視網(wǎng)膜電生理測(cè)試和視覺功能行為測(cè)試來(lái)完成口。雖測(cè)試評(píng)估方法均有自己獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),但是由于存在各自的缺點(diǎn),尚未被科學(xué)界公認(rèn)和接受。頭部跟蹤(head- racking-H)試驗(yàn)在1979年被 Cowey等(報(bào)道后其不斷改進(jìn)的測(cè)試方法,視動(dòng)測(cè)試已做為一種非侵入性技術(shù),被廣泛應(yīng)用于嚙齒類動(dòng)物視網(wǎng)膜功能減退的視覺功能量化評(píng)價(jià)。

1、視動(dòng)反應(yīng)測(cè)試的原理
Cahl等認(rèn)為圖像穩(wěn)定依靠頭部轉(zhuǎn)動(dòng)反射,是由視反射( optokinetic reflex,OKR)、視動(dòng)性眼震( optokineticnystagmus,OKN)和前庭眼反射( the vestibule- ocularreex,OR)這兩種類型的眼球運(yùn)動(dòng)反應(yīng)介導(dǎo)7。當(dāng)動(dòng)物或人通過(guò)視覺感知大部分視覺環(huán)境移動(dòng)時(shí)(如在一列移動(dòng)的火車上通過(guò)車窗注視車外風(fēng)景時(shí)),這些反射就會(huì)被觸發(fā)用于穩(wěn)定在視網(wǎng)膜上運(yùn)動(dòng)的圖像。而嚙齒類動(dòng)物的視網(wǎng)膜解剖結(jié)構(gòu)無(wú)黃斑中心凹,故它們鎖定其所看到的目標(biāo)的能力十分有限,相反其更容易引起嚙齒類動(dòng)物的代償性眼球運(yùn)動(dòng)。OKR誘導(dǎo)時(shí),視網(wǎng)膜的整個(gè)視覺場(chǎng)景的漂移,引起眼球同向快速地旋轉(zhuǎn),Z大限度地減少視網(wǎng)膜上的圖像的運(yùn)動(dòng)。因其不需要培訓(xùn),評(píng)估不同的中qu神經(jīng)系統(tǒng)的功能,并可以用Z少的消耗或適應(yīng)反復(fù)誘導(dǎo),并產(chǎn)生一個(gè)電子記錄,使結(jié)果分析更容易,量化數(shù)據(jù)更客觀。VOR是類似的響應(yīng)于頭的運(yùn)動(dòng),是來(lái)自前庭系統(tǒng),而不是通過(guò)視網(wǎng)膜的傳輸引起的。通常情況下,OKR和ⅤOR一起工作,以確保頭部和身體的運(yùn)動(dòng)時(shí)圖像在視網(wǎng)膜上的穩(wěn)定的。
2、視動(dòng)頭部追蹤裝置及改進(jìn)
目前普遍使用的視動(dòng)頭部追蹤檢測(cè)裝置是一個(gè)透明的轉(zhuǎn)鼓,直徑約在60~130cm,鼓中央有一個(gè)用來(lái)放置動(dòng)物的平臺(tái)。轉(zhuǎn)鼓內(nèi)側(cè)壁貼有可以更換的不同空間頻率和不同對(duì)比度的光波條柵。燈光從平臺(tái)上方照射,以步進(jìn)式電機(jī)控制轉(zhuǎn)鼓,可以順時(shí)針和逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng),轉(zhuǎn)動(dòng)速度可以調(diào)節(jié)。小鼠會(huì)隨著鼓壁上條柵的旋轉(zhuǎn)而轉(zhuǎn)動(dòng)其頭部,通過(guò)相機(jī)拍攝記錄小鼠的頭部運(yùn)動(dòng),通過(guò)計(jì)算花費(fèi)跟蹤運(yùn)動(dòng)的總時(shí)間,和改變條帶的寬度(不同的光柵頻率),建立視覺功能的測(cè)量和視力的量度。

據(jù)報(bào)道高ji哺乳動(dòng)物具有相當(dāng)大的視野重疊和雙眼視覺,而低等的哺乳動(dòng)物(如老鼠)的眼睛很少產(chǎn)生雙眼視。而低等哺乳動(dòng)物以鼻顳刺激誘發(fā)的視動(dòng)反應(yīng)是無(wú)的。色素大鼠兩側(cè)的單眼視動(dòng)刺激是高度不對(duì)稱的凹。對(duì)此 Thomas等{修改了原裝置(圖1),以單獨(dú)測(cè)量每一只眼睛的視動(dòng)反應(yīng),使左眼和右眼之間的頭跟蹤反應(yīng)結(jié)果直接比較。由于原始裝置中央平臺(tái)未做其他的特殊處理,老鼠容易從平臺(tái)上掉下或者偏離攝像頭,這將給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)不便,故在原有的設(shè)備基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。蔣麗琴等為了使頭部動(dòng)作觀察更加明顯,在老鼠頭頂黏有一塊橢圓形小紙板,紙板向上一面為黑色背景下有定距離的兩個(gè)小白點(diǎn),自行編寫的測(cè)量軟件通過(guò)追蹤小白點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)來(lái)記錄頭部的追隨運(yùn)動(dòng)。
3、OptoTrack動(dòng)物視動(dòng)反應(yīng)跟蹤分析系統(tǒng)的應(yīng)用
3.1  視網(wǎng)膜退變

動(dòng)物視動(dòng)反應(yīng)頭部跟蹤作為一種應(yīng)用于嚙齒類動(dòng)物視網(wǎng)膜病變的視覺功能評(píng)價(jià)的非侵入性技術(shù),在ji病不同階段通過(guò)調(diào)整刺激參數(shù)如條紋寬度、光柵速度和比敏感度的視動(dòng)得分來(lái)評(píng)估視網(wǎng)膜功能。用于評(píng)估視網(wǎng)膜退變( retinal degenerate,RD)動(dòng)物視動(dòng)頭部跟蹤響應(yīng)-,該研究使用了基于Jaa的軟件程序來(lái)創(chuàng)建并調(diào)節(jié)視動(dòng)的刺激參數(shù),如條的寬度、光柵速度和條紋運(yùn)動(dòng)的方向,并且以比較正常和視網(wǎng)膜退化大鼠和小鼠之間的反應(yīng)。并對(duì)其頭部反應(yīng)評(píng)分(“0”=沒(méi)有明顯的頭部跟蹤,“1”=Z小頭部跟蹤,“2”=好的頭部跟蹤但沒(méi)有身體的運(yùn)動(dòng),“3”=Z大頭部跟蹤和Z小的身體運(yùn)動(dòng),“4 Z大頭部跟蹤和大幅度的身體運(yùn)動(dòng))。Caroline等通過(guò)一個(gè)條紋寬度為28,光測(cè)量9c/m2的視動(dòng)轉(zhuǎn)鼓參數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在204只小鼠當(dāng)中有138只視網(wǎng)膜退化小鼠沒(méi)有顯示任何頭部跟蹤響應(yīng),剩余66只正常小鼠中45只表現(xiàn)出正常的反應(yīng),剩余21只中19只在第yi次測(cè)試中沒(méi)有反應(yīng),重復(fù)試驗(yàn)時(shí)顯示正常的反應(yīng),剩余2只是由于其他原因影響。

3.2   青光眼

青光眼出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的不可逆的損害,Z終導(dǎo)致視野的喪失。目前用于評(píng)估青光眼動(dòng)物模型的視覺障礙評(píng)估有兩種行為分析:視覺上的水迷宮任務(wù)和視動(dòng)鼓。視動(dòng)鼓依靠視覺運(yùn)動(dòng)反應(yīng),這種反射是一種生理反應(yīng),其非常適合于分析的電路和性能的視網(wǎng)膜神經(jīng)元的微妙變化。而在青光眼的研究中評(píng)估微妙的變化是確定新的干預(yù)策略能否成功的關(guān)鍵。Liang等建立高眼壓性青光眼小鼠模型來(lái)模擬人的高眼壓性青光眼,激光Zhi療后使用回彈式眼壓計(jì)監(jiān)測(cè)眼壓的變化并用視動(dòng)行為測(cè)試來(lái)測(cè)量視覺能力的相應(yīng)變化發(fā)現(xiàn),在激光Zhi療前,雙眼表現(xiàn)出正常的視力(左:0.375周/度;右0.397周/度)。在激光Zhi療后2mo,右眼的視力(眼壓)與左對(duì)照眼相比明顯下降(左:0.45周/度;右:0.228周度)。Stephanie等利用視動(dòng)反應(yīng)來(lái)定量DBA2J小鼠在青光眼產(chǎn)生前后視野缺損的情況,并且充分體現(xiàn)了視圖1行為測(cè)試儀器A:修改后的裝置示意圖,包括一個(gè)旋轉(zhuǎn)鼓以及條紋。從滾筒外部170°均勻照射和后面固定190°的黑色擋板,阻斷光源路徑。B:從上述滾筒加入視頻攝像機(jī),記錄的頭部運(yùn)動(dòng)固定的黑色擋板,并在轉(zhuǎn)鼓中心放置大鼠束縛器C:大鼠束縛器:將大鼠置于一個(gè)細(xì)管(不同的尺寸取決于大鼠尺寸管),其可轉(zhuǎn)動(dòng)180°。該管頭部一側(cè)的前面有開口。帶電板可以防止老鼠從爬出來(lái)。一旦受到電擊,老鼠會(huì)一直平靜地坐著,只轉(zhuǎn)動(dòng)頭部。老鼠一次測(cè)試4min,每只眼睛為2min,條紋鼓單向轉(zhuǎn)動(dòng),每個(gè)方向1min。頭部跟隨視動(dòng)鼓旋轉(zhuǎn)一次的時(shí)間(s)被記錄為“頭部跟蹤”的鼓的旋轉(zhuǎn)。兩個(gè)不同的條紋寬度應(yīng)對(duì)2個(gè)光柵頻率,每度0.25個(gè)周期(1cm,中等條紋)和每度0.125個(gè)周期(2cm,大條紋)以每分鐘兩圈的恒定轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)用攝像機(jī)記錄老鼠的頭部動(dòng)作供以后分析和評(píng)分。

動(dòng)反應(yīng)非侵入性的測(cè)量和評(píng)估視網(wǎng)膜視覺系統(tǒng)的功能。其研究的結(jié)果表明,增加眼壓與視覺空間性能(視力和對(duì)比敏感度)存在著相關(guān)性。
3.3   糖尿病視網(wǎng)膜病變

對(duì)于糖尿病動(dòng)物研究的視覺通路的功能缺損表現(xiàn)使用Z多的是視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,ERG)。ERG已用于動(dòng)物模型主要是量化全視野視網(wǎng)膜光閃爍的整體反應(yīng)具有感光功能的衰老和ji病的認(rèn)識(shí)是很有價(jià)值的。然而,視網(wǎng)膜內(nèi)層電路以及包括它們的無(wú)長(zhǎng)突和神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元均受糖尿病影響顯著[,使ERG不能完全解釋糖尿病模型。因此,需要在糖尿病的動(dòng)物模型的視覺功能的視動(dòng)測(cè)試。Asimov等(利用視動(dòng)頭部跟蹤設(shè)備對(duì)雜交的秋田鼠視覺損失進(jìn)行量化評(píng)估,結(jié)果表明在5~7.5月齡有顯著的視覺缺失并且發(fā)現(xiàn)糖尿病可以引起空間頻率關(guān)系的對(duì)比敏感度的改變。Aung等(2通過(guò)視動(dòng)跟蹤對(duì)鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的色素長(zhǎng)埃文斯大鼠的高血糖的糖尿病模型視功能進(jìn)行了評(píng)估,結(jié)果表明視動(dòng)測(cè)定的刺激參數(shù)與大鼠的血糖水平有一定的關(guān)系。

3.4  視網(wǎng)膜光損傷

視網(wǎng)膜光損傷是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,其中視紫紅質(zhì)在光損傷后視細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著十分重要的作用。在各種視網(wǎng)膜退行性病變的研究中,解釋和評(píng)估光感受器細(xì)胞的損傷、死亡與視功能的對(duì)應(yīng)關(guān)系也是眼科科研中的一個(gè)難題。陳曉勇等[2]利用視覺頭部跟蹤對(duì)28只SD大鼠在光損傷Zhi療前后連續(xù)測(cè)量動(dòng)物的視功能狀況,以觀察大鼠視力的連續(xù)變化過(guò)程,以評(píng)估不同程度視功能的損傷。李學(xué)民等通過(guò)視動(dòng)頭部跟蹤觀察SD大鼠視細(xì)胞光損傷模型發(fā)現(xiàn)隨著視細(xì)胞損傷程度的加重,SD大鼠的視功能呈現(xiàn)漸進(jìn)性的下降,其視覺-運(yùn)動(dòng)的平均運(yùn)動(dòng)速度亦出現(xiàn)相應(yīng)的變化。視覺一運(yùn)動(dòng)行為測(cè)試可以用于對(duì)SD大鼠的視功能進(jìn)行定量的評(píng)估。
3.5  其他eher氏遺傳性視神經(jīng)病變(IHON)是線粒體
呼吸鏈的復(fù)合物I突變引起的遺傳性ji病。該ji病的特征在于中央視力損失,由于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RCC)功能障礙和視神經(jīng)萎縮。Fabrice等通過(guò)視動(dòng)反射對(duì)艾地苯醌和短鏈苯醌對(duì)LHON的Zhi療效果進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果表明其在保護(hù)視力喪失和在加速視力恢復(fù)LHON患者療效明顯。張森等)通過(guò)轉(zhuǎn)鼓視力儀檢測(cè)豚鼠的顏色視覺并定量確定其顏色對(duì)比敏感度視力,以此評(píng)估豚鼠色覺和視功能。

4、總結(jié)
視動(dòng)頭部跟蹤是一種行為測(cè)試技術(shù),與傳統(tǒng)的視功能檢查技術(shù)相比具有方法簡(jiǎn)單、快速、重復(fù)、無(wú)創(chuàng)、不會(huì)被適應(yīng)的特點(diǎn)。雖然視動(dòng)反應(yīng)有其存在的局限如動(dòng)物的不配合致使測(cè)量不準(zhǔn)確,但是視覺頭部跟蹤具有很大的潛力,以增加我們對(duì)視網(wǎng)膜視覺系統(tǒng)的正常功能及病理機(jī)制的認(rèn)識(shí),以更好地了解、預(yù)防和Zhi療人類ji病,在未來(lái)的測(cè)定評(píng)估技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用,將對(duì)繼續(xù)了解發(fā)病機(jī)制和臨床前試驗(yàn)測(cè)試新的Zhi療起到至關(guān)重要的作用。