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動物抑郁行為實驗手冊丨糖水偏好實驗測試方法、指標評價及注意事項

糖水偏愛實驗(sucrose preference test)是檢測抑郁癥的一個典型癥狀快感缺失的經典實驗,是利用嚙齒類動物對甜味的偏好而設計一種檢測方法。動物禁食一段時間后, 同時給予白水和低濃度蔗糖水,以動物對蔗糖水的偏嗜度(蔗糖偏嗜度)為指標檢測動物是否出現(xiàn)快感缺失這一抑郁癥狀。


該實驗在大鼠慢性應激模型中應用極為廣泛,大鼠慢性不可預知性應激模型 的建立者Katz和大鼠慢性溫和應激模型的建立者Willner 分別于1982年和1987年采用糖水實驗檢測抑郁模型動物是否出現(xiàn)快感缺失癥狀。此外,該實驗為抗抑郁藥起效速率研究的主要行為學檢測方法之一。


實驗材料

糖水偏好測試儀采用了動物舒適且熟悉的居住飼養(yǎng)籠(homecage),如下圖示,飼養(yǎng)籠是透明聚碳酸酯材料,一側裝備了不銹鋼動物食槽,另一側安裝配置了2個不銹鋼瓶嘴的飲水瓶,可輕松取下來換水和清洗,飲水瓶容量為50ml-100ml可選,標配50ml。同時,飲水瓶上標有刻度,方便實驗員統(tǒng)計液體消耗量。靠近飲水瓶側下方鋪有不銹鋼底板,動物舔水時底板與不銹鋼瓶嘴通過微弱的電流形成閉合回路,可動態(tài)全程檢測動物的舔水次數(shù)。


糖水偏好實驗系統(tǒng),XR-268 型,上海欣軟

糖水偏好測試儀根據用戶的需求,還可以設置飲水瓶口自動門開關,增強飲水偏好選擇難度。同時,可選配外部接口模塊,實時與光遺傳、光纖記錄等第三方設備同步記錄打標。


實驗方法


大、小鼠糖水偏愛實驗的操作方法上略有不同,對其分別進行總結如下:

(1) 大鼠糖水偏愛實驗:

訓練期:動物應單籠飼養(yǎng),進行48h的蔗糖飲水訓練。前24h給予兩瓶 1% ~ 2%蔗糖水,后24h,一瓶給予1%~2%蔗糖水,另一瓶給予飲用純水(中途交換兩個水瓶位置)。大鼠禁食禁水14 ~ 23h后,進行糖水偏愛指數(shù)的測定:測定 1 h 內大鼠對兩瓶水的飲用量(g)。

(2) 小鼠糖水偏愛實驗:

操作流程同大鼠。但在48h飲水訓練時,應全程給予1% ~ 2%蔗糖水和飲用水(中途交換兩個水瓶位置)。訓練期結束后,禁水(不禁食)9~16h,測定8~15h內(中間宜交換兩瓶位置1次) 小鼠對兩瓶水的飲用量(g)。


評價指標


應采用蔗糖偏嗜度( sucrose preference)作為評價指標,蔗糖偏嗜度(%) = 蔗糖水飲用量/ (蔗糖水飲用量+飲用水飲用量)×100%。

抑郁行為判斷標準:蔗糖偏嗜度低于0. 4或者與對照組相比有顯著性減低(P< 0. 05)。

注意事項

1、應定期交替放置兩個瓶子的位置,以消除側面或位置偏愛的可能性。

2、可以在一整天或選定的時間段內測量蔗糖的偏愛。如果使用選定的時間段,則在整個動物中保持一致是很重要的,因為夜間節(jié)律會影響偏好行為。

3、可以用幾種方式來計算結果測量值,包括消耗的溶液總毫升數(shù)(甜味與不甜的比例)或每克體重消耗的蔗糖克數(shù)。雖然這兩個測量值通常在動物模型中相關,但后者可能會與壓力和焦慮有關的飲食失調行為、體重減輕有關系。

4、參靠實驗前2周內動物的飲水量數(shù)據,控制好糖水的配比濃度、液體量以及實驗時長。

5、在小鼠和大鼠的品系之間,在蔗糖偏愛方面也存在一些差異,比如Wistar大鼠不是特別敏感。

6、嚙齒動物在蔗糖偏愛方面的可能還有性別差異,比如Wistar Kyoto雄性大鼠的蔗糖偏愛率低于雌性。

7、實驗之前,動物單獨飼養(yǎng)通常建議48-72小時的適應時間。

8、 大鼠或小鼠必須處于單籠條件下(即單獨的籠子中)才能進行蔗糖偏愛測試。

9、實驗測試的整個周期里,選擇蔗糖的品牌盡量保持一致,避免其他因素對結果造成影響。

10、評估糖水偏好測試(SPT)的實驗指標優(yōu)先考慮蔗糖偏嗜度( sucrose preference),也就是蔗糖偏好比,而不是每只飲水瓶的攝入量

11、 糖水偏好測試過程中偶爾會存在飲水瓶漏水的現(xiàn)象,這種情況有可能是實驗員操作失誤,有可能是飲水瓶位置放置不正確,也有可能是動物舔水過程中無意泄漏的,這些現(xiàn)象很多時候可能會導致在規(guī)定時間內獲取的動物舔水攝入量差異不明顯(動物單次飲水量本就很有限),這個時候用戶可以選擇糖水偏好測試儀的計算出的動物舔水次數(shù)、飲水時間、舔水頻率等數(shù)據來參考統(tǒng)計,或許是另一條評估的好思路。

小tips:

① 在建立抑郁模型前后均做一次該實驗,效果更為明顯;

② 在訓練過程中12h后調換蔗糖水瓶和純水水瓶的位置,避免水瓶位置對實驗的干擾

③ 更加重要的是在正常實驗前一定要檢查好水瓶是否明顯漏水,以及一定要旋緊壓緊瓶蓋,實驗周期84h。



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